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遺傳基因擴增試驗又被稱為PCR試驗,其特性是能將少量的DNA大幅度提升,PCR是生物學科學研究和試驗的基本方式,廣泛運用于分子生物學各行各業(yè),比如:艾滋病檢測、乙肝、禽病疫、癌基因的檢驗和確診,DNA指紋識別、個人鑒別、dna鑒定及法醫(yī)物證,動、植物檢疫,小動物以及衍生品檢驗,寵物飼料、護膚品、食品衛(wèi)生安全檢驗,轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因水稻微生物檢驗等。
一、PCR實驗室合理布局
PCR實驗室正常情況下為試劑提前準備區(qū)、試品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增物質(zhì)剖析區(qū)四個獨立的工作中區(qū)域并設(shè)立專用型過道,各工作中區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)域與緩沖間宜安裝連鎖加盟設(shè)備。不一樣作用的工作區(qū)域應(yīng)是隔開單獨的,各工作區(qū)域有顯著的標示,不可以直達,假如緊密相連,需安裝物件不銹鋼傳遞窗。前兩區(qū)為擴增后區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),擴增后區(qū)與擴增前區(qū)應(yīng)嚴苛分離。試驗原材料、試劑、記錄紙、筆、清理原材料等,只有從擴增后區(qū)流入擴增后區(qū),即從試劑提前準備區(qū)→試品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增物質(zhì)剖析區(qū),不可反向流動性。實驗室的氣旋也需從擴增后區(qū)流入擴增后區(qū),不可反向流動性。各工作區(qū)域頂端應(yīng)安裝紫外線殺菌燈,紫外線殺菌燈的光波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外線殺菌燈。
二、實驗室各個區(qū)作用及關(guān)鍵機器設(shè)備
1、試劑提前準備區(qū):關(guān)鍵開展試劑的制備、散裝和主反映溶液的制備。試劑和用以試品制做的原材料應(yīng)立即運輸至該區(qū)域,不可歷經(jīng)其他區(qū)域。試劑原料務(wù)必存儲在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)關(guān)鍵機器設(shè)備有天平秤、電冰箱、離心脫水機、加樣器、震蕩器等。
針對氣旋工作壓力的操縱,本區(qū)并沒有嚴苛的規(guī)定。
2、試品制備區(qū):關(guān)鍵開展試品的儲存、核苷酸(RNA、DNA)獲取、存儲以及添加至擴增反映管和測量DNA的生成。本區(qū)關(guān)鍵機器設(shè)備有電冰箱、超凈工作臺、離心脫水機、加樣器、震蕩器、恒溫水浴槽等。
本區(qū)的滲透壓力規(guī)定為:相對性于相鄰區(qū)域為正壓力,以防止從相鄰區(qū)進到本區(qū)的氣溶膠污染。
3、擴增區(qū):關(guān)鍵開展DNA擴增。除此之外,已制備的DNA模版 (來源于試品制備區(qū))的添加和主反映溶液(來源于試劑提前準備區(qū))制備成反映溶液等也可在本區(qū)內(nèi)開展。本區(qū)關(guān)鍵機器設(shè)備有:擴增儀、電冰箱、離心脫水機、加樣器等。
本區(qū)的滲透壓力規(guī)定為:相對性于相鄰區(qū)域為負壓力,以防止大氣氣溶膠從本區(qū)露出。
4、擴增物質(zhì)剖析區(qū):擴增物質(zhì)的測量。本區(qū)關(guān)鍵機器設(shè)備有酶標儀、洗全自動切管機、加樣器和水浴箱等。
本區(qū)的滲透壓力的規(guī)定為:相對性于相鄰區(qū)域為負壓力,以防止擴增物質(zhì)從本區(qū)外擴散至其他區(qū)域。
三、PCR實驗室排風系統(tǒng)及工作壓力操縱
各區(qū)域中間應(yīng)具有單邊的試驗加工工藝流、貨運物流、人工流產(chǎn)與氣旋,產(chǎn)生單邊步驟的維護天然屏障,防止試驗中間的互相影響,避免 大氣氣溶膠外擴散對試驗全過程導致環(huán)境污染。
PCR實驗室并沒有嚴苛的潔凈規(guī)定,可是為防止每個試驗區(qū)域交叉式環(huán)境污染的概率,宜選用全送全排的自然通風方式,嚴控送、排風系統(tǒng)的占比以確保各試驗區(qū)的工作壓力規(guī)定。
四、PCR實驗室裝飾設(shè)計
實驗室排架結(jié)構(gòu)應(yīng)堅固、密封性好;全部陽角線宜選用弧形銜接;墻面內(nèi)腔光滑、不積塵、抗腐蝕、容易清洗消毒殺菌;路面應(yīng)用PVC卷材或環(huán)氧樹脂膠自流坪,原材料應(yīng)考慮無間隙、沒有滲漏、光滑、抗腐蝕的規(guī)定。
五、PCR實驗室常見問題
1、好多個區(qū)域的尺寸設(shè)定狀況,試劑提前準備區(qū)、擴增區(qū)、擴增物質(zhì)剖析區(qū),室內(nèi)空間能夠相對性小一些,試品制備區(qū)域置放超凈工作臺和低溫箱,室內(nèi)空間應(yīng)大一些。
2、試劑提前準備區(qū)、試品制備區(qū)設(shè)應(yīng)急立式洗眼器,以確保實際操作工作人員的安全性。
3、PCR實驗室沒有嚴苛的潔凈規(guī)定,能夠依據(jù)客戶的應(yīng)用狀況和資產(chǎn)的資金投入挑選。
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