消毒用品凈化車間衛(wèi)生管理制度
Hygienic standard for disinfection in hospitals
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB 15982-2012 代替 GB 15982-1995
2012-06-29發(fā)布 2012-11-01實(shí)施
前言
本標(biāo)準(zhǔn)所有技術(shù)內(nèi)容均為強(qiáng)制性。
本標(biāo)準(zhǔn)取代GB15982-1995醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。與GB15982-1995相比，本標(biāo)準(zhǔn)的主要變化如下：
--修改了標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍（見第一章，1995年版第一章）；
--修改規(guī)范性引用文件（見第二章，1995年版第二章）；
--修改術(shù)語，增加消毒產(chǎn)品、醫(yī)療器械和高度。中低危險(xiǎn)設(shè)備、滅菌和高水平、中低水平消毒、多種耐藥細(xì)菌的定義（見第3章，1995年版第3章）；
--修改了各種環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見4.1、4.2，1995版4.1)；
--修改醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見4.3，1995年版4.2)；
--修改使用中消毒劑的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見4.6，1995版4.3)；
--刪除無菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見1995年版4.3.2)；
--增加治療用水、防護(hù)用品、消毒劑、消毒器械、疫點(diǎn)（區(qū)）消毒衛(wèi)生要求（見4.4.4.5.4.4.4.7、4.9）
--修了污水處理衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和污水排放標(biāo)準(zhǔn)(見4.8，1995版4.4和4.5)；
--增加醫(yī)院消毒管理要求（見第五章）；
--修改了原附錄A的采樣檢查方法(見附錄A，1995版附錄A)；
--修改空氣采樣及檢查方法(見A.2，1995版A.1)；
--修改醫(yī)療用品采樣及檢查方法(見A.5，1995版A.5)；
--增加治療用水、紫外線燈、消毒設(shè)備、醫(yī)院污水檢查方法、疫點(diǎn)（區(qū)）消毒效果檢測方法和大腸。
--菌群檢查方法(見A.7.A.8.A.9.A.1.A.12)；
--刪除原附錄B本標(biāo)準(zhǔn)用詞說明(見1995版附錄B)；
--添加新附錄B試劑與培養(yǎng)基(見附錄B)。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國衛(wèi)生部提出并歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省疾病預(yù)防控制中心、北京市疾病預(yù)防控制中心、中國疾病預(yù)防控制中心、北京大學(xué)第一醫(yī)院、北京長江脈醫(yī)藥科技有限公司、杭州朗索醫(yī)用消毒劑有限公司、上海利康消毒高新技術(shù)有限公司、強(qiáng)生（上海）醫(yī)療器械有限公司、上海九宇生物科技有限公司、北京創(chuàng)新世紀(jì)生化科技發(fā)展有限公司、衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督中心、上海市疾病預(yù)防控制中心、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、武漢市疾病預(yù)防控制中心、福建省疾病預(yù)防控制中心、浙江興昌風(fēng)機(jī)有限公司。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：胡國慶、鄧小紅、張流波、李六億、喬宏、戴彥珍、孫建生、邊雪蓮、顧京宇、沈偉、徐燕、梁建生、林立旺、陳楚暉、任銀萍、王志、張一鳴。
本標(biāo)準(zhǔn)所所代替標(biāo)準(zhǔn)版本的發(fā)布情況如下：
-GB15982-1995。
醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、醫(yī)院消毒管理要求和檢查方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)。各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和采血供血機(jī)構(gòu)按照規(guī)定執(zhí)行。
2 規(guī)范性引用文件。
以下文件對(duì)本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用至關(guān)重要。所有注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。
GB4789.3食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)。
食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB4789.4。
GB/T489.11食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)溶血性鏈球菌檢驗(yàn)。
GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。
GB7918.4化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法綠膿桿菌。
GB7918.5化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法金黃色葡萄球菌。
GB18466醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)。
GB19082醫(yī)用一次性防護(hù)服技術(shù)要求。
GB19083醫(yī)用防護(hù)口罩技術(shù)要求。
GB19193疫源消毒總則。
GB19258紫外線殺菌燈。
GB50333醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范。
WS310.1醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第一部分：管理規(guī)范。
WS310.2醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第二部分：清洗消毒及滅菌技術(shù)操作規(guī)范。
WS310.3醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第三部分：清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)。
WS/T311醫(yī)院隔離技術(shù)規(guī)范。
WS/T313醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范。
YY0469醫(yī)用外科口罩技術(shù)要求。
YY0572血液透析及相關(guān)治療用水。
消毒技術(shù)規(guī)范衛(wèi)生部。
國家環(huán)?？偩轴t(yī)院污水處理技術(shù)指南。
中華人民共和國藥典衛(wèi)生部。
衛(wèi)生部醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法。
3 以下術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1消毒產(chǎn)品disinfectionproduct。列入衛(wèi)生部《消毒產(chǎn)品分類目錄》，用于醫(yī)院消毒的消毒劑、消毒器械和衛(wèi)生用品。
3.2醫(yī)療器械medicaldevice/healthcareproduct。
用于診斷、治療、護(hù)理、支持和替代的設(shè)備、設(shè)備和物品的總稱。根據(jù)使用中感染的風(fēng)險(xiǎn)程度，分為高危醫(yī)療器械、中危醫(yī)療器械和低危醫(yī)療器械。
3.2.1高危醫(yī)療器械criticaldevice/items。
進(jìn)入正常的無菌組織，脈管系統(tǒng)或無菌體液（如血液）流過，一旦被微生物污染，就會(huì)導(dǎo)致極高的感染風(fēng)險(xiǎn)。
3.2.2中度危險(xiǎn)性醫(yī)療器械semi-criticaldevice/items。
直接或間接接觸粘膜的設(shè)備。
3.2.3低危醫(yī)療器材no-criticaldevice/items。
只接觸完整皮膚而不接觸粘膜的設(shè)備。
3.3滅菌sterilization。在醫(yī)療器械上殺滅或清除所有微生物。滅菌的無菌保證水平應(yīng)達(dá)到10-6。
3.4高水平消毒high-leveldisinfection。殺滅各種細(xì)菌繁殖體、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌孢子。
3.5中水平消毒intermediate-leveldisinfection。殺滅除細(xì)菌芽孢外的各種病原微生物。
3.6低水平消毒low-leveldisinfection。只能殺滅細(xì)菌繁殖體（分枝桿菌除外）和親脂性病毒。
3.7多種耐藥菌multidrug-resistantorganism；MDRO。三種或三種以上的抗三種以上抗菌藥物同時(shí)呈現(xiàn)耐藥細(xì)菌。常見的多種耐藥細(xì)菌包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、耐萬古霉素腸球菌(VRE)、超廣譜β一內(nèi)酰胺酶(ESBLS)細(xì)菌、耐碳青霉烯抗菌藥物腸桿菌(CRE)(如新德里金屬β內(nèi)酰胺酶[NDM-1]或碳青霉烯酶[KPC]腸桿菌)、耐碳青霉烯抗菌藥物鮑曼不動(dòng)桿菌(CR-AB)、多種耐藥/泛耐藥銅綠假單胞菌(MDR/PDR-PA)和多種耐藥結(jié)核分枝桿菌。
4 醫(yī)院消毒衛(wèi)生要求。
4.1各種環(huán)境空氣，物體表面。
4.1.1菌落總數(shù)應(yīng)符合表1要求。
第一類環(huán)境是采用空氣清潔技術(shù)的診斷和治療場所，分為清潔手術(shù)部和其他清潔場所。第二類環(huán)境為非潔凈手術(shù)部（室）；產(chǎn)房；導(dǎo)管室；血液病房、燒傷病房等保護(hù)性隔離病房；重癥監(jiān)護(hù)病房；新生兒室等。第三類環(huán)境為母嬰同室；消毒供應(yīng)中心檢查包裝滅菌區(qū)和無菌物品儲(chǔ)存區(qū)；血液透析中心（室）；其他普通住院病房等。第四類環(huán)境為普通門（急診）及其檢查、治療室；傳染病科門診和病房。
表1 各類環(huán)境空氣、物體表面菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
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環(huán)境類別
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空氣平均菌落數(shù)a
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物體表面平均菌落數(shù)CFU/cm2
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CFU／皿
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CFU/m3
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I類環(huán)境
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潔凈手術(shù)室
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符合GB 50333要求
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≤150
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≤5．0
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其他潔凈場所
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≤4. 0(30 min)b
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Ⅱ類環(huán)境
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≤4. 0(15 min)
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--
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≤5．0
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Ⅲ類環(huán)境
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≤4. 0(5 min)
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--
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≤10．0
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Ⅳ類環(huán)境
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≤4.0(5 min)
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--
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≤10．0
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a CFU／皿為平板暴露法，CFU/m3為空氣采樣器法。
b 平板暴露法檢測時(shí)的平板暴露時(shí)間。
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4.1.2當(dāng)涉嫌醫(yī)院感染或疑似暴發(fā)與醫(yī)院環(huán)境有關(guān)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行目標(biāo)微生物檢測。
4.2醫(yī)務(wù)人員手。
4.2.1消毒后，醫(yī)務(wù)人員手表面菌落總數(shù)應(yīng)≤10CFU/cm2。
4.2.2外科手消毒后，醫(yī)務(wù)人員手表面菌落總數(shù)應(yīng)≤5CFU/cm2。
4.3醫(yī)療器械。
4.3.1高危醫(yī)療器械應(yīng)無菌。
4.3.2中度危險(xiǎn)醫(yī)療器械菌落總數(shù)應(yīng)≤20CFU/件(CFU/g或CFU/100cm2)，不得檢測致病微生物。
4.3.3低度危險(xiǎn)醫(yī)療器械菌落總數(shù)應(yīng)≤200CFU/件(CFU/g或CFU/100cm2)，不得檢測致病微生物。
4.4治療用水。
血液透析相關(guān)治療用水應(yīng)符合YY0572要求；其他治療用水應(yīng)符合相應(yīng)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。
4.5防護(hù)用品。
醫(yī)用防護(hù)口罩、外科口罩、一次性防護(hù)服等防護(hù)用品應(yīng)符合GB19083.YY0469和GB19082
4.6消毒劑。
4.6.1滅菌劑。皮膚粘膜消毒劑應(yīng)采用純化水或無菌水，其他消毒劑應(yīng)符合GB5749的要求。
4.6.2使用中消毒劑的有效濃度應(yīng)符合使用要求；每天使用前應(yīng)監(jiān)測連續(xù)消毒劑的有效濃度。
4.6.3滅菌消毒劑的菌落總數(shù)為0CFU/ml；皮膚粘膜消毒劑的菌落總數(shù)應(yīng)符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)要求；其他消毒劑的菌落總數(shù)應(yīng)≤100CFU/ml，不得檢測致病微生物。
4.7消毒器械。
4.7.1使用中消毒殺菌因子強(qiáng)度應(yīng)符合使用要求。紫外線燈應(yīng)符合GB19258的要求，紫外線燈(30W)的輻射照度值應(yīng)≥70uW/cm2。
4.7.24.7.2工作環(huán)境中產(chǎn)生的有害物質(zhì)濃度(強(qiáng)度)應(yīng)符合有關(guān)規(guī)定。臭氧消毒設(shè)備的工作環(huán)境臭氧濃度應(yīng)為0.16mg/m3。環(huán)氧乙烷滅菌器的工作環(huán)境應(yīng)為2mg/m3。
4.8污水處理。
污水排放應(yīng)符合GB18466的要求。
4.9疫點(diǎn)(區(qū))消毒。
消毒效果應(yīng)符合GB19193的要求。
5 醫(yī)院消毒管理要求
5.1建筑布局及消毒隔離設(shè)施。
5.1.1建筑設(shè)計(jì)和工作流程應(yīng)滿足傳染病防治和醫(yī)院感染控制的需要，消毒隔離設(shè)施配置應(yīng)滿足。
WS/T311及《消毒技術(shù)規(guī)范》相關(guān)規(guī)定。
5.1.2傳染病科、消毒供應(yīng)中心(室)、手術(shù)部(室)、重癥監(jiān)護(hù)病房、血液透析中心(室)、新生兒室、內(nèi)鏡中心(室)、口腔科等重點(diǎn)部門的建筑布局和消毒隔離應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定。
5.1.3潔凈場所的設(shè)計(jì).驗(yàn)收參照GB50333的要求，完成全性能監(jiān)測應(yīng)由合格的第三方單位完成。
5.1.4II類環(huán)境及門診(急診)。病房等診療場所應(yīng)按WS/T313要求配置合適的手衛(wèi)生設(shè)施，并提供洗手清潔劑、手消毒劑和干手設(shè)施。
5.2消毒產(chǎn)品使用管理。
5.2.1使用的消毒產(chǎn)品應(yīng)符合國家有關(guān)法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范等管理規(guī)定，并按照批準(zhǔn)或規(guī)定的范圍和方法使用。
5.2.2含氯消毒劑、過氧化氫消毒劑等揮發(fā)性消毒劑應(yīng)配備現(xiàn)用消毒劑；過氧乙酸、二氧化氯等二元消毒劑活化后應(yīng)立即使用。使用化學(xué)消毒和滅菌的醫(yī)療設(shè)備，使用前應(yīng)用無菌水（過濾后的生活飲用水可用于高水平消毒內(nèi)鏡）充分沖洗，以去除殘留物。不得使用過期和無效的消毒劑。醫(yī)療設(shè)備不得采用甲醛自然熏蒸法進(jìn)行消毒。滅菌管腔醫(yī)療設(shè)備不得采用戊二醛熏蒸法進(jìn)行消毒。
5.2.3滅菌器需要驗(yàn)證滅菌效果的，應(yīng)當(dāng)由省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門認(rèn)定的消毒鑒定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。滅菌物品的無菌檢查應(yīng)當(dāng)按照《中華人民共和國藥典》和《無菌檢查法》的要求進(jìn)行。使用消毒設(shè)備滅菌的消毒者，經(jīng)培訓(xùn)合格后方可上崗。
5.3重復(fù)清洗醫(yī)療器械。
按WS310.2執(zhí)行清洗程序。對(duì)傳染病病原體污染有特殊要求的醫(yī)療器械，應(yīng)先消毒后清洗。
5.4消毒滅菌方法選擇原則。
5.4.1高危醫(yī)療器械在使用前應(yīng)進(jìn)行滅菌。使用中度危險(xiǎn)醫(yī)療器械前，應(yīng)選擇高水平消毒或中水平消毒。使用低危險(xiǎn)設(shè)備前，可選擇低水平消毒或保持清潔。
5.4.2耐濕性。耐熱的醫(yī)療設(shè)備應(yīng)首選壓力蒸汽滅菌；管腔和（或）閥門設(shè)備應(yīng)采用滅菌程序或外部設(shè)備供應(yīng)商提供的滅菌方法。
5.4.3玻璃滅菌是玻璃設(shè)備、油劑和干粉物品的首選；其他方法應(yīng)符合《消毒技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定。
5.4.4不耐熱、不耐濕的醫(yī)療器械應(yīng)選用經(jīng)國家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的低溫滅菌方法。
5.4.5重復(fù)使用的氧氣濕化瓶.吸引瓶.嬰兒暖箱水瓶和加熱加濕罐應(yīng)采用高水平消毒。
5.5環(huán)境.物體表面消毒。
5.5.1環(huán)境。物體表面應(yīng)保持清潔；肉眼可見污染時(shí)應(yīng)及時(shí)清潔消毒。
5.5.2經(jīng)常接觸的物體表面，如治療車、床欄、床頭柜、門把手、燈開關(guān)、水龍頭等，應(yīng)每天清潔消毒。
5.5.3當(dāng)患者的血液、嘔吐物、糞便或病原微生物被污染時(shí)，應(yīng)根據(jù)具體情況選擇中等水平以上的消毒方法。對(duì)于少量（10ml）的飛濺，可在消毒前進(jìn)行清潔；對(duì)于大量（>10ml）的血液或體液飛濺，應(yīng)使用吸濕材料去除可見污染，然后進(jìn)行清潔和消毒。
5.5.4人員流動(dòng)頻繁。擁擠的診療場所應(yīng)每天工作后進(jìn)行清潔和消毒。傳染病科。重癥監(jiān)護(hù)病房。保護(hù)隔離病房（如血液病房。燒傷病房）。耐藥菌和多種耐藥菌污染的診療場所應(yīng)隨時(shí)消毒和終末消毒。
5.5.5拖把(頭)和抹布應(yīng)清洗、消毒、干燥后備用。建議使用脫卸拖頭。
5.6通風(fēng)和空氣消毒。
5.6.1應(yīng)采用自然通風(fēng)和(或)機(jī)械通風(fēng)，確保診療場所的空氣循環(huán)和通風(fēng)次數(shù)；采用機(jī)械通風(fēng)時(shí)，重癥監(jiān)護(hù)室等重點(diǎn)部門應(yīng)采用頂送風(fēng)、下回風(fēng)，建立合理的氣流組織。
5.6.2呼吸道發(fā)熱門診及其隔離觀察室(區(qū))。呼吸道傳染病收治病房采用集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)的，應(yīng)在通風(fēng)系統(tǒng)中安裝空氣消毒裝置。無空氣清潔技術(shù)的手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房、保護(hù)性隔離病房(如血液病房、燒傷病房)應(yīng)在通風(fēng)系統(tǒng)中安裝空氣消毒裝置。
5.6.3空氣消毒方法應(yīng)遵循《消毒技術(shù)規(guī)范》?；瘜W(xué)噴霧不宜用于空氣消毒。
5.7消毒供應(yīng)中心(室)管理。
WS.310要求消毒供應(yīng)中心(室)的建筑布局及清潔。
5.8污水污水處理。
5.8.1醫(yī)院污水處理設(shè)施的設(shè)計(jì)、建設(shè)和管理應(yīng)符合GB18466和《醫(yī)院污水處理技術(shù)指南》的要求。
5.8.2醫(yī)療廢物管理應(yīng)符合《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》和《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》的要求。
5.9疫點(diǎn)(區(qū))消毒。應(yīng)符合GB19193的要求。
附錄A
（規(guī)范性附錄）
采樣及檢查方法
A.1采樣檢查原則。
A.1.1取樣后，應(yīng)盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測，送檢時(shí)間不得超過4h；樣品保存在O℃~4℃時(shí)，送檢時(shí)間不得超過24h。
A.1.2不建議醫(yī)院對(duì)滅菌物品進(jìn)行常規(guī)無菌檢查。當(dāng)流行病學(xué)調(diào)查懷疑醫(yī)院感染事件與滅菌物品有關(guān)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)物品的無菌檢查。常規(guī)監(jiān)督檢查不得進(jìn)行致病性微生物檢測，涉及疑似醫(yī)院感染爆發(fā)、醫(yī)院感染爆發(fā)調(diào)查或工作中懷疑微生物污染時(shí)，應(yīng)進(jìn)行目標(biāo)微生物檢測。
A.1.3可使用經(jīng)驗(yàn)證的現(xiàn)場快速檢測儀器監(jiān)督篩查環(huán)境、物體表面等微生物污染和醫(yī)療器械清潔度；也可用于醫(yī)院清潔效果檢查和清潔程序的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。
A.2空氣微生物污染檢查方法。
A.2.1采樣時(shí)間。
一類環(huán)境在清潔系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動(dòng)前取樣；二、三、四類環(huán)境在消毒或規(guī)定通風(fēng)后與從事醫(yī)療活動(dòng)前取樣。
A.2.2檢測方法。
A.2.2.1I環(huán)境可選用平板暴露法和空氣采樣器法，參照GB50333《醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范》要求進(jìn)行檢測。空氣采樣器法可選用六級(jí)沖擊式空氣采樣器或其他經(jīng)驗(yàn)證的空氣采樣器。檢測時(shí)，采樣器應(yīng)放置在室內(nèi)中心0.8m~l.5m的高度，并按照采樣器使用說明書操作，每次采樣時(shí)間不得超過30min。如果房間大于10m2，每增加10m2增加一個(gè)采樣點(diǎn)。
A.2.2.2、三、四類環(huán)境采用平板暴露法。室內(nèi)面積≤30m2，內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)距墻1m；室內(nèi)面積>30m2，4角和中心5點(diǎn)，4角布點(diǎn)距墻1m。普通營養(yǎng)瓊脂平板（直徑90mm）放置各取樣點(diǎn)，取樣高度為0.8m~l.5m；取樣時(shí)，打開平板蓋，扣在平板旁邊，暴露規(guī)定時(shí)間（二類環(huán)境暴露15min，三類環(huán)境暴露5min），蓋上平板蓋及時(shí)檢查。
A.2.2.3將36℃±1℃的恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.2.3結(jié)果計(jì)算。
A.2.3.1平板暴露法按平均每皿菌落數(shù)報(bào)告：CFU/(皿暴露時(shí)間)。
A.2.3.2型(1)空氣采樣器法的計(jì)算公式:
A.3物體表面微生物污染檢測方法。
A.3.1采樣時(shí)間。
對(duì)潛在污染區(qū)毒后采樣。清潔區(qū)根據(jù)現(xiàn)場情況確定。
采樣面積A.3.2。
表面≥100cm2，取100cm2。
A.3.3采樣方法。
將5cm×5cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有無菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水或生理鹽水取樣液，在規(guī)格板內(nèi)水平、垂直涂抹5次，然后轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)取樣1~4個(gè)規(guī)格板面積，切斷手接觸部分，將棉拭子放入裝有10ml取樣液的試管中進(jìn)行檢查。門把手等小物體直接用棉拭子取樣。如果取樣物體表面有消毒劑殘留，取樣液應(yīng)含有相應(yīng)的中和劑。
A.3.4檢測方法。
采樣管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.0ml接種平盤，將熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每盤冷至40℃~45℃，注入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.3.5結(jié)果計(jì)算[如式(A.2)]
A.4醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生檢查方法。
A.4.1采樣時(shí)間。
在接觸病人或從事醫(yī)療活動(dòng)前，取樣手部衛(wèi)生后。
用無菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水取樣液將棉拭子從手指曲面到手指來回涂抹兩次(一只手涂抹面積約30cm2)，然后轉(zhuǎn)動(dòng)取樣棉拭子，切斷手接觸部位，將棉拭子放入裝有10ml取樣液的試管中進(jìn)行檢查。取樣面積按平方厘米(cm2)計(jì)算。如果取樣時(shí)手上有消毒劑殘留，取樣液應(yīng)含有相應(yīng)的中和劑。
A.4.2采樣方法。
A.4.3檢測方法。
采樣管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.OML接種平盤，將熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每盤冷至40℃~45℃，注入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.4.4結(jié)果計(jì)算[如式(A.3)]
A.5醫(yī)療器材檢查方法。
A.5.1采樣時(shí)間。
消毒或滅菌后，在儲(chǔ)存有效期內(nèi)取樣。
A.5.2滅菌醫(yī)療器材檢查方法。
A.5.2.1可采用破壞性方法取樣的，如一次性輸液（血）器、注射器、注射針等，按照《中華人民共和國藥典》中的無菌檢查法進(jìn)行。對(duì)于不能采用破壞性方法取樣的醫(yī)療設(shè)備，在環(huán)境清潔度1萬級(jí)以下的單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)中，將浸入無菌生理鹽水取樣液的棉拭子涂抹在被檢物體表面，取樣全部表面或不少于100cm2；然后將棉拭子除去手接觸部分進(jìn)行無菌檢查。
A.5.2.2牙科手機(jī):每部手機(jī)應(yīng)放置在單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)中，環(huán)境潔凈度在10000級(jí)以下的局部潔凈度在100級(jí)以下，分別放置在含有20ml~25ml采樣液的無菌大試管(內(nèi)徑25mm)中，液位高度應(yīng)大于4.0cm，在渦旋混合器上沖擊30s以上，取洗脫液進(jìn)行無菌檢查。
A.5.3消毒醫(yī)療器材的檢查方法。
A.5.3.1全部可放入無菌試管，用洗脫液浸泡后震蕩30s以上，取洗脫液1.OML接種平皿，將熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿倒入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)(CFU/件)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.5.3.2如果可以通過破壞性方法取樣，則在100級(jí)超凈工作臺(tái)上取1glog樣品，放入配有10ml采樣液的試管中進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.OmL接種平皿，計(jì)數(shù)菌落數(shù)(CFU/g)，必要時(shí)分離致病性微生物。對(duì)于不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器械，在100級(jí)超凈工作臺(tái)上，用浸入無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣。
A.5.3.3消毒后內(nèi)鏡：取清洗消毒后內(nèi)鏡，用無菌注射器提取含有相應(yīng)中和劑的50ml洗脫液，從活檢口注入洗滌內(nèi)鏡管道，并充分收集（蠕動(dòng)泵）進(jìn)行檢查。將洗脫液充分混合，取洗脫液1.0ml接種平板，將熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基倒入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（CFU/件）。剩余洗脫液在無菌條件下用濾膜（0.45μm）過濾濃縮，將濾膜連接到凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上（注意不要產(chǎn)生氣泡），在36℃±1℃溫箱中培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。
當(dāng)濾膜法不能計(jì)數(shù)時(shí)：
菌落總數(shù)(CFU/件)=m(CFU/平板)×50...(A.4)
式中：
m-平行平板平均菌落數(shù)。
濾膜法可計(jì)數(shù)時(shí)：
菌落總數(shù)(CFU/件)=m(CFU/平板)mf(CFU/濾膜)...(A.5)
式中：
m-平行平板平均菌落數(shù)；
mf-濾膜上的菌落數(shù)。
A.6消毒劑檢查方法。
A.6.1消毒劑采樣。
采樣分為庫存消毒劑和使用中的消毒劑。
A.6.2消毒劑有效成分含量檢查方法。
庫存消毒劑的有效成分含量應(yīng)按照《消毒技術(shù)規(guī)范》或產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測；上述方法可用于測量消毒劑的有效濃度，也可用于監(jiān)測國家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的消毒劑濃度試紙（卡）。
A.6.3采用中消毒劑染菌量檢查方法。
A.6.3.1用無菌吸管按無菌操作方法吸收1.0ml檢測消毒劑，加入9ml中和劑混合均勻。醇類和酚類消毒劑用普通營養(yǎng)肉湯中和，含氯消毒劑，含碘消毒劑和過氧化物消毒劑0.1%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰，季銨鹽消毒劑含0.3%吐溫80.3%卵磷脂中和劑，醛類消毒劑含0.3%甘氨酸中和劑。
A.6.3.2用無菌吸管吸收一定稀釋比例的中和后混合物1.0ml接種平皿，將熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基倒入15ml~20ml，冷至40℃~45℃，36℃±1℃恒溫箱培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)；必要時(shí)分離致病微生物。
消毒劑染菌量(CFU/ml)=平均每株菌落數(shù)×10×稀釋倍數(shù)...(A.6)
A.7水檢方法。
YY0572檢測血液透析相關(guān)治療用水。其他治療用水按相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
A.8紫外線燈檢查方法。
A.8.1紫外線燈采樣。
采樣分為庫存紫外線燈和使用中的紫外線燈。
A.8.2檢查庫存(新啟用)紫外線燈輻射照度值。
按GB19258進(jìn)行。
A.8.3采用中紫外線燈輻射照度值檢查方法。
A.8.3.1儀器法。打開紫外線燈5min后，將測定波長為253.7nm的紫外線輻射計(jì)探頭放置在被檢紫外線燈下垂直距離1m的中心。儀器穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)為紫外線燈的輻射照度值。
A.8.3.2指示卡法。打開紫外線燈5min后，將指示卡放置在紫外線燈下垂直距離1m處，圖案一側(cè)向上，照射1min，觀察指示卡色塊的顏色，并將其與標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行比較。
A.8.4注意事項(xiàng)。
紫外線輻照計(jì)應(yīng)當(dāng)在計(jì)量部門批準(zhǔn)的有效期內(nèi)使用；紫外線監(jiān)測指示卡應(yīng)當(dāng)經(jīng)國家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)，并在產(chǎn)品有效期內(nèi)使用。
A.9消毒器械檢查方法。
A.9.1殺菌因子強(qiáng)度測定:按照《消毒技術(shù)規(guī)范》或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。
A.9.2工作環(huán)境中有害物質(zhì)濃度(強(qiáng)度)的測定:按照《消毒技術(shù)規(guī)范》或相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行測試。
A.10醫(yī)院污水檢查方法。
檢測按GB18466規(guī)定進(jìn)行。
A.11疫點(diǎn)(區(qū))消毒效果檢測方法。
檢測按GB19193規(guī)定進(jìn)行。
A.12大腸菌群檢查方法。
檢測按GB4789.3進(jìn)行。
A.13沙門茵檢查方法。
檢測按GB4789.4進(jìn)行。
A.14乙型溶血性鏈球菌檢測方法。
檢測按GB/T4789.11進(jìn)行。
A.15銅綠假單胞菌檢查方法。
檢測按GB7918.4進(jìn)行。
A.16金黃色葡萄球菌檢查方法。
檢測按GB7918.5進(jìn)行。
A.17其他目標(biāo)微生物檢測方法。
按相關(guān)檢測方法進(jìn)行。
附錄B
（規(guī)范性附錄）
試劑和培養(yǎng)基
B．10.03 moI/L磷酸鹽緩沖液(0.03 moI/L PBS)
稱取磷酸氫二鈉2.84 g，磷酸二氫鉀1.36 g，加入到1000 mL蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7. 2～7.4，于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．2洗脫液
稱取蛋白胨10. 00 g，氯化鈉8.50 g，吐溫-80 1.0mL，加入到1 000 mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液中，加熱溶解后調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．3生理鹽水
稱取氯化鈉8. 50 g，溶解于1000 mL蒸餾水中，于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．4 革蘭染色液及染色方法
B. 4.1結(jié)晶紫染色液：稱取結(jié)晶紫1.00 g，溶解于20 mL 95%酒精中，然后與80 mL 1%草酸銨水溶液混合。
B．4.2革蘭碘液：稱取碘1. 00 g，碘化鉀2.00 g，混合后加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300 mL，混勻。
B．4.3沙黃復(fù)染液：稱取沙黃0. 25 g，溶解于10 mL 95%酒精溶液中，然后加入90 mL蒸餾水，混勻。
B．4.4染色方法如下：
a)將涂片在火焰上固定。
b)滴加結(jié)晶紫染色液，作用1 min，水洗。
c)滴加革蘭碘液，作用1min，水洗。
d)酒精脫色30 s；或?qū)⒕凭螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用酒精滴滿整個(gè)涂片，脫色10 s。
e)水洗，滴沙黃復(fù)染液，作用1 min，水洗。
f)待干鏡檢。
B．5人（兔）血漿
取滅菌3.8%檸檬酸鈉1份，加人（兔）全血4份，混勻靜置，3 000 r／min離心5 min，取上清，棄血球
B．6 普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
B．6.1 成分：蛋白胨10 g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、瓊脂15 g、蒸餾水1000 mL。
B．6.2制作方法：除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.2～7.4，加入瓊脂，加熱溶解，分裝于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．7血瓊脂培養(yǎng)基
B．7.1 成分：營養(yǎng)瓊脂100 mL、脫纖維羊血（或兔血）10 mL。
B．7.2制作方法：將營養(yǎng)瓊脂加熱熔化待冷至50℃左右，以無菌操作將10 mL脫纖維血加入后搖勻，傾注平皿，置冰箱備用。
B．8 需-厭氧菌培養(yǎng)基
B．8.1成分：酪胨（胰酶水解）15 g、牛肉膏3g、葡萄糖5g、氯化鈉2.5 g、L-胱氨酸0.5 g、硫乙醇酸鈉0.5 g、酵母浸出粉5 g、新鮮配制的0.1%刃天青溶液1．o mL或新配制的0.2%亞甲藍(lán)溶液0.5 mL、瓊脂0.5 g～0. 7g、蒸餾水1 000 mL。
B．8.2制作方法：除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入蒸餾水中，微溫溶解后，調(diào)pH至弱堿性，煮沸、濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)pH至6.9～7.3，分裝后115℃壓力蒸汽滅菌30 min。
B．9 SCDLP液體培養(yǎng)基
B．9.1 成分：酪蛋白胨17 g、大豆蛋白胨3g、葡萄糖2.5 g、氯化鈉5g、磷酸氫二鉀2.5 g、卵磷脂lg、吐溫-80 7g、蒸餾水1 000 mL。
B．9.2制作方法：將各種成分混合（如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替），加熱溶解后，調(diào)pH至7.2～7.3，分裝于121℃壓力蒸汽滅菌20 min，搖勻，冷至25℃使用。
B．10伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基
B．10.1成分：蛋白胨10 g、乳糖10 g、磷酸二氫鉀2g、2%伊紅溶液2 mL、0.65%美藍(lán)溶液1 mL、瓊脂17 g、蒸餾水1000 mL。
B．10.2制作方法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.1，分裝后121℃壓力蒸汽滅菌20 min。臨用時(shí)，以無菌操作加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至50℃時(shí)，加入伊紅和美藍(lán)溶液搖勻，傾注平皿，置4℃冰箱備用。
B．11 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基
B．11.1 成分：胨10 g、氯化鈉5g、葡萄糖5g、肉浸液1000 mL。
B．11.2制作方法：取胨與氯化鈉加入肉浸液內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)pH至弱堿性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)pH至7.0～7.4，分裝，于115℃壓力蒸汽滅菌30 min。
B．12甘露醇培養(yǎng)基
B．12.1 成分：蛋白胨10 g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、甘露醇10 g、0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液12 mL、蒸餾水1 000 mL。
B．12.2 將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加入蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚藍(lán)混勻后，分裝，于115℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．13 乳糖膽鹽發(fā)酵管 GB 15982-2012
B．13.1成分：蛋白胨20 g、豬膽鹽（或牛，羊膽鹽）5g、乳糖10 g、0.04%溴甲酚紫水溶液25 mL、蒸餾水1 000mL。
B．13.2制作方法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分裝(每管10 mL)，并放入一個(gè)發(fā)酵管，于115℃壓力蒸汽滅菌15 min。
B．14乳糖發(fā)酵管
B．14.1 成分：蛋白胨20 g、乳糖10 g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸餾水1 000 mL。
B．14.2制作方法：將蛋白胨及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分裝(每管10 mL)，并放入一個(gè)發(fā)酵管，于115℃壓力蒸汽滅菌15 min。
B．15溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基
B．15.1 成分：蛋白胨10 g、葡萄糖5g、2%溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL、蒸餾水1000 mL。
B．15.2制作方法：將蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7．O～7.2，加入2%溴甲酚紫酒精溶液，搖勻后，分裝(每管5 mL)，并放入一個(gè)發(fā)酵管，于115℃壓力蒸汽滅菌30 min，置4℃冰箱備用。
B．16綠膿菌素測定用培養(yǎng)基
B．16.1 胨20 g、氯化鎂（無水）1.4 g、硫酸鉀10 g、甘油10 mL、瓊脂18 g～20 g、蒸餾水1 000 mL。
B．16.2制作方法：取胨、氯化鎂、硫酸鉀加入水中，微溫使溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2～7.4，分裝于小試管，滅菌。
B．17 明膠培養(yǎng)基
B．17.1 胨5 g、明膠120 g、牛肉浸出粉3g、蒸餾水1 000 mL。
B．17.2取上述各成分加入水中，浸泡約20 min，隨時(shí)攪拌，加熱使溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2～7.4，分裝于小試管，滅菌。
B．18 注意事項(xiàng)
B．18.1 雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分為乳糖膽鹽發(fā)酵管的2倍；3倍濃縮乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分為乳糖膽鹽發(fā)酵管的3倍。
B．18.2培養(yǎng)基用的試管口和三角燒瓶口應(yīng)用棉塞或硅膠制成的塞子，再用牛皮紙包好。
B．18.3試劑與培養(yǎng)基配制好后應(yīng)置清潔處保存，常溫下不超過1個(gè)月。培養(yǎng)基推薦4℃冷藏保存。
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